Inibição da expressão de cd90 (thy-1) interfere com a migração celular em células primárias isoladas do tumor de células gigantes do osso

Abstract

Objetivo: O tumor de células gigantes do osso é uma neoplasia benigna primária do osso que pode cursar com metástase em 2% dos casos. O tratamento dessa patologia consiste principalmente na remoção cirúrgica do tumor. Estudos recentes apontam a proteína de superfície CD90 como uma molécula importante no processo de oncogênese, porém não há relatos na literatura que investiguem seu papel no TCG. Nesse contexto, a compreensão do papel desta molécula na história natural do TCG é importante. O objetivo desse estudo é investigar a expressão de CD90 nesse tumor e explorar sua relação com a proliferação e migração celular. A expressão de CD90 foi acessada em amostras do tumor primário de 23 casos (10 amostras de pacientes com metástase e/ou recidiva e 13 de pacientes sem metástase e/ou recidiva) e avaliada através de imunohistoquímica. Posteriormente, foi classificada de zero (ausente) a três (intensa) considerando a dispersão e a intensidade da marcação no corte histológico, havendo variabilidade na expressão sem diferença entre os grupos (p=0,595). A expressão celular do CD90 foi avaliada por citometria de fluxo em células isoladas a partir do tecido tumoral fresco de três pacientes. Nestas 37,3% das células foram CD90+ . Em seguida, realizamos a análise da expressão de CD90 em células primárias e observamos percentual de 93% a 99% de células CD90+ . Afim de, investigar sua função no TCG, avaliamos o efeito do silenciamento desta molécula sobre a migração e proliferação das células da cultura primária e como resultado obtivemos redução significativa na expressão desta molécula entre os dias 7 e 12 após a transfecção (p<0,0001), com o retorno da expressão acontecendo por volta do dia 14 após a eletroporação. Para avaliar a funcionalidade do CD90 nas células de TCG, foram realizados ensaios de migração celular e análise de proliferação. Na condição controle de eletroporação (SCR)foi observada taxa de migração de 85,4% e na condição em que o CD90 foi silenciado, houve redução na migração para 61,9%. A atividade proliferativa foi analisada através de imunocitoquímica para Ki67. O número médio de células Ki67 positivas nas condições controle, SCR e SiRNA CD90 foi de 18,23±3,3, 12,21±3,8 e 15,82±2,0, respectivamente (Valor p = 0,412), indicando que o silenciamento não interfere na proliferação celular. Portanto, os tecidos tumorais primário e de recidiva do TCG expressam CD90 (Thy-1), porém sem relação com a ocorrência de recidiva. In vitro, as células isoladas também mostram expressão desta molécula que está relacionada com a migração celular.

Objective: The giant cell tumor of the bone is a benign primary neoplasm of bone that can travel with metastasis in 2% of cases. The treatment for this pathology consists mainly in the surgical removal of the tumor. Recent studies point to the CD90 surface protein as an important molecule in the oncogenesis process, but there are no reports in the literature investigating its role in GCT. In this context, understanding the role of this molecule in the natural history of GCT is important. The aim of this study is to investigate the expression of CD90 in this tumor and to explore its relation with cell proliferation and migration. CD90 expression was accessed in primary tumor samples from 23 cases (10 samples from patients with metastasis and / or relapse and 13 from patients without metastasis and / or relapse) and evaluated by immunohistochemistry. Subsequently, it was classified from zero (absent) to three (intense) considering the dispersion and the intensity of the marking in the histological section, with variability in the expression without difference between the groups (p = 0.595). Cellular expression of CD90 was evaluated in cells isolated from the tumor tissue of three patients by flow cytometry. In these 37.3% of the cells were CD90 +. Then, we performed the analysis of CD90 expression in primary cells and observed a percentage of 93% to 99% of CD90 + cells. In order to investigate its function in TCG, we evaluated the effect of silencing on the migration and proliferation of primary culture cells and as a result we obtained a significant reduction in expression of this molecule between days 7 and 12 after transfection (p <0.0001), With the return of the expression happening around the 14th day after electroporation. To evaluate the functionality of CD90 in TCG cells, cell migration and proliferation analysis assays were performed. In the SCR condition, a migration rate of 85.4% was observed, and in the condition that CD90 was silenced, there was a reduction in migration to 61.9%. The proliferative activity was analyzed by immunocytochemistry for Ki67. The mean number of Ki67 cells in the control, SCR and CD90 SiRNA conditions was 18.23 ± 3.3, 12.21 ± 3.8 and 15.82 ± 2.0, respectively (Value p = 0.412), indicating That silencing does not interfere with cell proliferation. Therefore, primary tumor tissue and GCT recurrence express CD90 (Thy-1), but unrelated to the occurrence of recurrence. In vitro, isolated cells also show expression of this molecule that is related to cell migration.